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實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

小鼠破骨分離自骨組織和骨髓；破骨細胞是骨組織中的多核巨細胞，位于骨組織表面的淺凹處。目前一般認為破骨細胞是分離自骨骼外的造血系統，其前體可能屬于造血干細胞的前單核細胞。破骨細胞的主要功能是維持骨吸收和骨形成的相對平衡，若失去這種平衡則發生病理性變化。因此多數學者從破骨細胞著手研究破骨細胞的結構、功能探討骨吸收，形成相互平衡的機制。但破骨細胞是一種終末分化細胞，屬于不增殖細胞群，不能增殖和傳代，只能進行原代培養且存活時間較短。

方法簡介：

公司實驗室分離的小鼠破骨采用機械分離法/密度梯度離心法和骨髓單核細胞誘導法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

公司實驗室分離的小鼠破骨經TRAP染色檢測，純度可達30%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養信息：

培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 多核巨細胞

傳代特性 屬于終末分化細胞；屬于不增殖細胞群

消化液 0.25%

培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象發生請及時和我們聯系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養條件一致，若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現象。觀察好細胞狀態后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養基重懸細胞，并接種到新的培養瓶或培養皿中，置于培養箱中進行培養。

5. 請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基來培養細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產品：

血清游離（FC）含量測定試劑盒   可見分光光度法   50管/48樣

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組織及血液酸性0酸酶（ACP）試劑盒   可見分光光度法   50管/24樣

組織及血液堿性0酸酶（AKP/ALP）試劑盒   可見分光光度法   50管/24樣

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Humahymus-dependeaigen,TD-AgELISAKit 人依賴性抗原(TD-Ag)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforAAA(HumanAi-adrenocoicalaibody)ELISAKit人抗腎上腺皮質抗體

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CTNNB1重組人 beta-Catenin / CTNNB1 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

CCL15 Protein Human 重組人 CCL15 / MIP-5 / MIP-1 delta 蛋白 (aa 46-113, His 標簽)

CD36 Protein Mouse 重組小鼠 CD36 / SCARB3 蛋白

DR3/TRAMP (death receptor-3 0.5mgDR3/TRAMP (death receptor-3) DR3 死亡受體(抗原)

CCL15 Protein Human 重組人 CCL15 / MIP-5 / MIP-1 delta 蛋白 (aa 46-113, His 標簽)

NTRK1重組大鼠 TrkA / NTRK1 蛋白 (Fc 標簽) Protein

CD36 Protein Mouse 重組小鼠 CD36 / SCARB3 蛋白

CTNNB1重組人 beta-Catenin / CTNNB1 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

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Porcine telomerase (TE) ELISA Kit 豬端粒酶(TE)試劑盒

轉基因植物TE基因核酸試劑盒 48T

CLIAKitforMCAb(Mousemelanocyteaibody)ELISAKit小鼠黑色素細胞抗體

體液血管緊張素Ⅰ轉化酶1(ACE1)活性熒光共振能量轉移法(FRET)定量試劑盒20次

ELISAKitIgE馬免疫球蛋白E