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產(chǎn)品僅供研究使用，不適用于人類或臨床診斷
商品屬性：

產(chǎn)品英文名稱：Mouse IL-15 protein

產(chǎn)品中文名稱：重組小鼠白介素-15（IL-15)

規(guī)格：5 μg/20 μg/100 μg/1 mg

貨號：EY-01X8691
用途：僅供科研研究實驗

特點&優(yōu)勢:

標簽:無標簽

表達宿主:大腸桿菌

種屬:小鼠

序列:氨基酸序列來源于小鼠源：IL-15 蛋白（P48346）（Asn49Ser162）表達的蛋白片段，在 N 端用 6×His 標簽表達。

活性:以其誘導CTLL-2 細胞增殖的能力來衡量。該效應的ED50<10 ng/mL。重組小鼠IL-15 的特異性活性:約>1x 10? IU/mg。

蛋白長度：該蛋白質(zhì)的計算分子量為 14.2 kDa，在還原條件下，蛋白質(zhì)遷移為 17 kDa（SDS-PAGE 分析）。

純度:> 98 % ，使用SDS-PAGE檢測

動?動

背景

白細胞介素-15（IL-15）是一種 14-15 kDa 的糖蛋白，在多種細胞類型中具有免疫調(diào)節(jié)功能。IL-15 可在多種細胞類型中組成型表達，作為細胞內(nèi)蛋白儲存在細胞質(zhì)中，也可轉(zhuǎn)運到細胞表面，但只能從某些細胞類型中分泌，包括單核細胞、樹突狀細胞、上皮細胞、骨髓基質(zhì)細胞和成纖維細胞。作為一種多效細胞因子，IL-15 在先天性免疫和適應性免疫之間起著中介作用，其主要作用是殺死受病毒感染的細胞。IL-15 在 NK 細胞的發(fā)育、分化和存活過程中起著至關重要的作用。在單核細胞中，IL-15 可誘導產(chǎn)生 IL-8 和單核細胞趨化蛋白 1（MCP-1），從而將中性粒細胞和單核細胞募集到感染部位。IL-15 還可作為 T 淋巴細胞的趨化誘導劑，并調(diào)節(jié) T 淋巴細胞的分化。

本產(chǎn)品具有下列特點:

 1.操作簡便、快捷。可直接加入到檢測平板。在96-孔板中檢測時,無需洗滌或收獲細胞,免去溶解步驟。

2. 無放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。

3. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發(fā)性的有機溶劑來溶解甲臜產(chǎn)物。

4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數(shù)后可放回溫箱繼續(xù)孵育,使顏色進一步生成。

操作步驟：

(一)獲得目的基因

1、通過PCR方法:以含目的基因的克隆質(zhì)粒為模板,按基因序列設計一對引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。

2、通過RT-PCR方法:用TRIzol法從細胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA第一鏈,以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板進行PCR循環(huán)獲得產(chǎn)物。

(二)構(gòu)建重組表達載體

1、載體酶切:將表達質(zhì)粒用限制性內(nèi)切酶(同引物的酶切位點)進行雙酶切,酶切產(chǎn)物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。

2、PCR產(chǎn)物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。

(三)  獲得含重組表達質(zhì)粒的表達菌種

1、 將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,根據(jù)重組載體的標志(抗Amp或藍白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質(zhì)粒,雙酶切初步鑒定。

2、 測序驗證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進入下步操作。否則應篩選更多克隆,重復亞克隆或亞克隆至不同酶切位點。

3、 以此重組質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化表達宿主菌的感受態(tài)細胞。

(四)誘導表達

1、挑取含重組質(zhì)粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過夜培養(yǎng)。

2、按1∶50比例稀釋過夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養(yǎng)基的300ml培養(yǎng)瓶中, 37℃震蕩培養(yǎng)至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。

3、取部分液體作為未誘導的對照組,余下的加入IPTG誘導劑至終濃度0.4mM作為實驗組,兩組繼續(xù)37℃震蕩培養(yǎng)3hr。

4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。

5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。

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